کلونینگ و بهینه سازی کدون ژن فنیل آلانین دهیدروژناز در سیستم بیانی e.coli و مقایسه بیان ژن با دو پروموتور t۷ و λpr
Authors
abstract
چکیده سابقه و هدف: یکی از کاربردهای پزشکی آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز، تعیین مقدار دقیق سطح l- فنیل آلانین در سرم خون افراد جهت شناسایی بیماران مبتلا به بیماری فنیل کتونوریا می باشد. در این مطالعه، میزان بیان پروتئین مورد نظر بعد از بهینه سازی کدون ژنی (pdh ) در دو ناقل بیانی pet-23a و ppr37 در میزبان بیانی e.coli بررسی شد. روش بررسی: در این تحقیق تجربی، از ژن فنیل آلانین دهیدروژناز (pdh) بهینه سازی شده مربوط به باکتری b. sphaericus استفاده شد که در دو ناقل بیانی pet-23a و ppr37 کلون گردید. بیان ژن pdh در ناقلین بیانی pet-23a و ppr37 به ترتیب با افزودن القاگر شیمیایی iptg(1mm) و تغییر دمایی 30 به 42 درجه سانتی گراد صورت گرفت. بهینه سازی کدون با نرم افزار jcat انجام گرفت . آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز(phedh) با استفاده از ستون کروماتوگرافیni-nta تخلیص گردید. در ادامه با sds-psge 10% وزن مولکولی نسبی زیر واحد phedh را در حدود kda 41 نشان داده شد. همچنین خلوص و میزان پروتئین توسطsds-page تعیین گردید. یافته ها: بیشترین میزان بیان 8 ساعت بعد از القاء در سازه petpdh/ bl21(de3)plyss مشاهده شد، در حالی که میزان بیان در همان مدت زمان در سازه دیگر بسیار پایین بود. فعالیت ویژه آنزیم بعد از به کار گیری روش تخلیصی u/mg 705 از پروتئین محاسبه شد. بیان پروتئین مورد نظر بعد از بهینه سازی کدون و در سازه ژنی petpdh بیشتر بود. نتیجه گیری: با توجه به مقایسه دو سازه ژنی در بیان پروتئین مورد نظر، سازهpetpdh احتمالاًجهت تولید آنزیم pedh در مقیاس بالا مناسب تر بوده و بر اساس این تحقیق برای این کار توصیه می گردد. واژگان کلیدی: فنیل آلانین دهیدروژناز، بیان، پلاسمید، پروموتور.
similar resources
کلونینگ و بهینه سازی کدون ژن فنیل آلانین دهیدروژناز در سیستم بیانی E.coli و مقایسه بیان ژن با دو پروموتور T7 و λPR
Abstract Background: This study was performed on the base of importance of phenylalanine dehydrogenase (PheDH) in the outbreak of phenylketonuria (PKU). In order for PKU screening one of the medical applications of enzyme is, identifying and quantifying the exact amount of L-phe in blood serum. The research question was whether the level of protein expression changes after optimization of codon...
full textمقایسه تأثیر وضعیت طاق باز و دمر بر وضعیت تنفسی نوزادان نارس مبتلا به سندرم دیسترس تنفسی حاد تحت درمان با پروتکل Insure
کچ ی هد پ ی ش مز ی هن ه و فد : ساسا د مردنس رد نامرد ي سفنت سرتس ي ظنت نادازون داح ي سکا لدابت م ي و نژ د ي سکا ي د هدوب نبرک تسا طسوت هک کبس اـه ي ناـمرد ي فلتخم ي هلمجزا لکتورپ INSURE ماجنا م ي دوش ا اذل . ي هعلاطم ن فدهاب اقم ي هس عضو ي ت اه ي ندب ي عضو رب رمد و زاب قاط ي سفنت ت ي هـب لاتـبم سراـن نادازون ردنس د م ي سفنت سرتس ي لکتورپ اب نامرد تحت داح INSURE ماجنا درگ ...
full textکلونینگ و بیان ژن اینترفرون آلفاb2ی انسانی در سیستم بیانی اشرشیاکلی
زمینه و هدف: اینترفرون‌ها وسیلة دفاعی بدن علیه ویروس‌ها هستند که به سرعت در بدن تولید شده، سلولهای اطراف را به تولید پروتئین‌هایی که تکثیر ویروس را مهار، یا پاسخ ایمنی و رشد سلولی را کنترل می‌کنند، تحریک می‌کنند. با توجه به اهمیت دارویی اینترفرون آلفا b2 انسانی در ایران و جهان، تولید این دارو در داخل کشور و از طریق بیوشیمیایی امکان‌پذیر اما بسیار مشکل می‌باشد. زیرا تولید این ...
full textجداسازی، همسانه سازی و بیان ژن زیرواحد آلفا فیکوسیانین در سیستم بیانی اشرشیاکلی
فیکوسیانین رنگدانه آبی رنگی است که در دو گروه از جلبک ها و سیانوباکترها ازجمله Spirulina وجود دارد. این رنگدانه دارای فعالیت های متنوع زیستی است و کاربردهای گوناگونی در صنعت غذایی، آرایشی و دارویی دارد. پیشرفت های زیادی جهت تولید فیکوسیانین در مقیاس بالا انجام شده است، اما اغلب روش ها مشکل و با هزینه های بالایی قابل انجام هستند؛ درصورتی که همسانه سازی و بیان فیکوسیانین به صورت نوترکیب روشی ارزا...
full textجداسازی و کلونینگ ژن انسانی MAGEA4 در پلاسمید بیانی pRUF
سابقه و هدف: کنسر تستیس آنتی ژن ها دست های از آنتی ژن ها می باشند که به طور ویژه بیان آن ها در سلول های زایا و انواع مختلفی از سرطان ها دیده شده است. یکی از اعضای این خانوادهMAGEA4 می باشد که این آنتی ژن با انواع تومورها در ارتباط است. از آنجا که عملکرد این ژن هنوز به درستی مشخص نشده است، هدف از این مطالعه تکثیر و کلونینگ این ژن در وکتور بیانی به منظور تولید پروتئین نوترکیب بیان کننده MAGEA4 ا...
full textتاثیر هارمالین بر بیان ژن Dnmt1 و هیپومتیلاسیون پروموتور ژن P15 در رده سلولی لوسمیک NB4
چکیده سابقه و هدف متیلاسیون DNA در ناحیه پروموتر ژنهای سرکوبگر تومور از جمله P15 ، به عنوان یکی از مهمترین مکانیسمهای ایجاد بدخیمیهای خونی مطرح است .هارمالین یکی از آلکالوئیدهای مشتق شده از گیاه اسپند است که دارای خاصیت آنتیپرولیفراتیو بر روی رده‌های سلولی لوسمیک می‌باشد. در این مقاله تاثیر هارمالین بر کاهش بیان ژنDnmt1 و هیپومتیلاسیون ناحیه پروموتر ژن P15 در رده سلولی NB4 مورد بررسی قرا...
full textMy Resources
Save resource for easier access later
Journal title:
پژوهش در پزشکیجلد ۳۷، شماره ۴، صفحات ۲۱۱-۲۱۹
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023